Recogida de muestras | Whatman
Tarjetas Whatman de manchas de sangre seca de Millipore Sigma, validadas por Metabolon
Las tarjetas Whatman 903 están bien establecidas en las pruebas clínicas (cribado de recién nacidos) y son fáciles de usar y de manipular tanto en casa como en el laboratorio. El uso de tarjetas de manchas de sangre seca (PSD) como técnica de extracción de muestras de sangre es muy adecuado para situaciones en las que las condiciones de almacenamiento en frío extremo (es decir, hielo seco o refrigeración) necesarias para el plasma o el suero son inalcanzables. También son una alternativa viable a las visitas a la clínica, ya que pueden prepararse de forma fiable en un proceso de extracción a domicilio dirigido por el paciente. Además, las tarjetas de ECP son adecuadas para tratar volúmenes de muestra limitados y son un método menos invasivo, lo que hace más sostenibles los estudios longitudinales y farmacocinéticos que requieren extracciones frecuentes.
Figura 1. Perfiles metabolómicos del plasma y las muestras de sangre seca desglosados por la vía Super, para las sustancias bioquímicas detectadas en al menos el 70% de las muestras de cada matriz en una cohorte de 49 donantes.
Sensibilidad y precisión de las tarjetas Whatman para manchas de sangre secas
Como comparación directa, tabulamos el número de sustancias bioquímicas con nombre que se detectaron en cada conjunto de muestras (DBS y plasma). La Figura 1 ilustra la similitud en la composición de Super Pathway entre las muestras de plasma y de DBS. Reconocemos que las tarjetas DBS (sangre entera) y el plasma son matrices diferentes, y no se recomienda la comparación directa entre ellas. Sin embargo, incluso con estas diferencias inherentes, nuestros datos apoyan la conclusión de que los perfiles metabolómicos son similares entre plasma y DBS, y que las firmas metabólicas conocidas detectadas en plasma se mantienen en las muestras de DBS. Para más información, descargue nuestro artículo técnico.
Estabilidad de las tarjetas Whatman para manchas de sangre secas
La estabilidad a corto plazo (STS) de metabolitos en manchas de sangre seca se evaluó utilizando un conjunto de tarjetas DBS preparadas a granel a partir de un único pool de sangre total (WB) durante un máximo de 28 días. La estabilidad a largo plazo (LTS) se evaluó en 17 lotes de tarjetas DBS (manchas de 25 µL de sangre venosa EDTA disódica) que se almacenaron hasta 7 meses a RT y -20°C, y se analizaron tras la preparación inicial (T0), a los 3 meses y a los 7 meses. Alrededor del 95% de los compuestos son estables o se estabilizan a la tercera semana de almacenamiento, independientemente de la temperatura. Lea nuestro artículo técnico para obtener más información.
Figura 2. Proporción de sustancias bioquímicas a cada temperatura asignadas a cada categoría de estabilidad a corto plazo. El verde indica estabilidad a lo largo de los días 1-28, el azul indica estabilidad tras 12-21 días de almacenamiento y el rojo indica estabilidad limitada o nula a lo largo del periodo de almacenamiento de 28 días. RT, temperatura ambiente; WB, sangre entera líquida. STS, efecto de estabilidad a corto plazo.
Robustez de las tarjetas Whatman para manchas de sangre secas
Una diferencia clave entre las tarjetas DBS en comparación con el plasma o el suero es la inclusión del componente celular de la sangre total (es decir, el hematocrito; HCT). En circunstancias normales, éstos comprenderán ~35-50% del volumen total en adultos.1,2 El rango de proporción de glóbulos rojos en una muestra estándar de DBS que se perfila utilizando metabolómica es potencialmente grande, y las diferencias en HCT pueden afectar a la DBS de múltiples maneras. Metabolon ha validado el uso de tarjetas Whatman 903 como matriz viable para la metabolómica global no dirigida utilizando nuestro Global Discovery Panel. Se evaluaron múltiples variables para determinar los límites y riesgos de los ensayos de ECP, incluyendo el volumen de punto, la ubicación del punzón, el HCT y el envío a temperatura ambiente en condiciones de alto calor/humedad. Con estudios bien diseñados, se puede minimizar el efecto de estas variables. Para obtener más información, descargue nuestro artículo técnico.
Detección de firmas metabólicas en tarjetas de manchas de sangre secas
Al comparar tarjetas de plasma y ECP, es importante garantizar que las firmas metabólicas conocidas del plasma se detecten de forma fiable en las ECP.Nuestros experimentos de validación biológica indicaron que las muestras de ECP mantienen el metabolismo alimentado frente al ayunado(Figura 3) y permiten detectar marcadores comunes de la diabetes, así como marcadores específicos de la ingesta alimentaria, el estrés y otros estilos de vida, lo que subraya el valor de las ECP en la investigación del metabolismo.
Figura 3. Los niveles del marcador de estrés oftalmato y del cuerpo cetónico 3-hidroxibutirato (BHBA) durante un ayuno de sólo agua de 4 días muestran la precisión y el mantenimiento de las firmas metabólicas dentro de los individuos a lo largo del tiempo utilizando tarjetas ECP.
Referencias
1. Mondal, H. y D.P. Budh, Hematocrit, en StatPearls. 2021, StatPearls Publishing: Treasure Island (FL).
2. Billett, H.H., Hemoglobin and Hematocrit, en Clinical Methods: The History, Physical, and Laboratory Examinations, H.K. Walker, W.D. Hall, and J.W. Hurst, Editors. 1990, Butterworths: Boston.
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